
تعداد نشریات | 21 |
تعداد شمارهها | 610 |
تعداد مقالات | 9,028 |
تعداد مشاهده مقاله | 67,082,893 |
تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 7,656,361 |
تکثیر ،کلونینگ و بیان ژن نوترکیب bp26( omp28 )باکتری B. Melitensisجدا شده از استان مرکزی و تخلیص پروتئین BP26 | ||
تحقیقات آزمایشگاهی دامپزشکی | ||
مقاله 64، دوره 4، شماره 1 - شماره پیاپی 7، شهریور 1391، صفحه 70-70 اصل مقاله (183.64 K) | ||
نویسندگان | ||
مریم عزیزپور مغوان1،سید داود حسینی*2، حسین بصیری3، ندا اکبری 3* ؛ میترا نظام آبادی4 ، صابر اسکندری5، محسن ساریخانی6 | ||
تاریخ دریافت: 09 بهمن 1395، تاریخ بازنگری: 04 اسفند 1403، تاریخ پذیرش: 09 بهمن 1395 | ||
چکیده | ||
مقدمه و هدف: بروسلوز بیماری ناتوان کننده ای است که و هزینه گزافی را بر اقتصاد و اجتماع تحمیل می کند . بنابراین استفاده از بهترین ، دقیق ترین و به صرفه ترین روش برای تشخیص این بیماری ضروری می باشد . عامل شایع بروسلوز در ایران B. melitensis بوده و پروتئین BP26 این باکتری خاصیت آنتی ژنیسیته خوبی دارد. بنابراین هدف از این تحقیق تولید پروتئین BP26 نوترکیب از باکتریB. Melitensis توسط وکتور بیانیpET-28a می باشد . موادوروش کار: در این مطالعه از باکتری کشت شده تخلیص DNA ژنومیک به روش پروتئیناز K و فنل/کلرفرم ، انجام شد .سپس با توجه به اطلاعات توالی ژن bp26 B. melitensis موجود در بانک اطلاعات ژن ، برای ژن مذکور پرایمر طراحی شده و واکنش PCR راه اندازی، بهینه سازی و انجام شد. در ادامه محصول PCRابتدا در وکتور PTZ57R/T الحاق گردید و پس از آن در وکتور pET-28aکلون گردید . وکتور نوترکیب به میزبان E. coli BL21(DE3) منتقل گردید و پروتئین نوترکیب و با ستون کروماتوگرافی Ni-NTA علیه His tag تخلیص گردید . نتایج وبحث: اندازه ژن به دست آمده از واکنش زنجیره ای پلیمراز با اندازه بخشی از ژنbp26 B. melitensis موجود در بانک اطلاعات ژن مطابقت داشت . ژن bp26 بدون القاء با IPTG به میزان کم بیان شده و با افزودن آن به غلظت mM 1 به محیط کشت در ساعت سوم ، حداکثر بیان را مشاهده نمودیم . تولید پروتئین نوترکیب BP26 از باکتری B. melitensis بومی استان مرکزی با استفاده ازناقل پلاسمیدی pET-28a امکان پذیر گردید . با توجه به اهمیت این پروتئین و به منظور بررسی های بیشتر در آینده ، امکان تولید آن در کشور فراهم شد . | ||
کلیدواژهها | ||
B. melitensis؛ ژن bp26؛ OMP28؛ بروسلوز | ||
آمار تعداد مشاهده مقاله: 634 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 192 |